1、梯度洗脫的原理是什么？
①梯度洗脫是指在同一個分析周期中，按一定程度不斷改變流動相的濃度配比，達到有效分離的洗脫方式。梯度洗脫一般采用二元流動相，通常為水相和有機相。
②梯度洗脫時流動相通常由多種不同極性的溶劑組成。梯度洗脫主要原理是通過調整不同時間段流動相的極性來調節各個組分的容量因子K，使得在合適的時間范圍內將各個組分的保留合理分配，最終實現最佳分離。
2、影響出峰時間的因素有哪些？
①流動相的pH值主要是影響到分配系數而導致各組分出峰時間的不同。
②除此之外，影響出峰時間的因素還有很多，從分配系數、容量因子等各個方面考慮，除了與目標化合物在固定相和流動相中的分配性質有關，還與流速，壓力，柱溫等液相色譜儀參數有關，具體涉及下面幾種因素的影響：
a、目標化合物本身，具體包括分子量、結構、化合物類型、極性等；
b、流動相，具體包括流動相構成、配比、流動相各組分極性，洗脫方式，流速等；
c、固定相，具體包括固定相種類、結構、色譜柱長度等；
d、分配系數與容量因子，具體包括化合物在流動相與固定相之間的分配情況，柱溫等。
3、怎樣將目標物的保留時間提前？
問題描述：用液相色譜儀做某物質含量測定時，保留時間太長，20min左右才出峰，有沒什么方法可以將保留時間提前？
可以從通過改變目標組分容量因子K、縮短柱長、增加柱溫等方式將保留時間提前，具體可以采取以下方法：
①調整流動相，具體包括調整流動相構成、配比、流動相各組分極性、洗脫方式、提高流速等。
②調整固定相，具體包括固定相種類、結構、縮短色譜柱長度等。
③增加柱溫，降低流動相傳質阻力等。
4、如何計算溶劑強度(容量因子)K？
①容量因子指在一定溫度和壓力下組分在兩相中分配達平衡時，分配在固定相和流動相中的質量比。容量因子反映了組分在柱中的遷移速率，又稱作分配比，用符號K表示。
②在容量因子的具體計算公式中，需要注意的是，容量因子與分配系數不同，容量因子除了與性質及溫度有關外，還與Vs、Vm有關。由于t’R、tm較Vs、Vm易于測定，所以容量因子應用更廣泛。
5、怎樣改變流動相比例來延長保留時間？
問題描述：采用C18柱測定黃酮苷，用甲醇+乙腈+四氫呋喃+醋酸(1:1:19.4:78.6)溶液做流動相，分離效果不理想，想通過延長保留時間的方式提高分離度，具體應該如何操作？
①甲醇+乙腈+四氫呋喃+醋酸(1:1:19.4:78.6)溶液做流動相，流動相的pH值可能會超過色譜柱的耐受范圍，因此不建議使用。建議直接使用甲醇-水或是乙腈-水作為流動相，水相中可以適當加點甲酸或是乙酸來得到最佳分離效果。
②通常可以通過降低流速、減小有機相比例、調節流動相pH值或更換較長的色譜柱等方式延長待測組分的保留時間，從而達到提高組分之間分離度的目的。
6、為什么保留時間總在變化？
問題描述：采用高效液相色譜儀分析苯甲酸時，流動相走了很久，進樣以后保留時間還是不斷漂移，是什么原因造成的？
保留時間一直在變，說明系統沒有平衡好，可以從多個方面去排查原因。
①流動相可能是最主要的原因，流動相平衡時間是否充足、管路有沒有氣泡、流動相中有機相是否蒸發、比例閥工作是否正常。
②泵有可能存在問題，輸液是否正常、壓力是否穩定、泵密封墊是否完好、是否有漏點。
③色譜柱也需要排查，是否恒溫、是否有漏液。
7、什么是液相色譜的基線？
①當色譜柱中僅有流動相通過時，檢測器所產生的響應信號的曲線。
②穩定的基線應該是一條接近于水平的直線，反應的是隨著時間變化的檢測器系統噪聲值。
8、分離度應大于1.5是指什么？
①分離度是衡量色譜柱分離效果的指標，它表示相鄰組分色譜峰的分離情況，具體為相鄰組分色譜峰保留值tRI，tRII之差與兩峰寬WI，WII平均寬度之比，用符號R表示。
②兩峰間距離越大，兩峰越窄，R值就越大，分離的就越好。當R=1時，兩色譜峰交疊約4%，可稱為基本分離；當R=1.5時，兩色譜峰交疊約0.3%，可視為相鄰兩組分完全分離。
③分離度要求大于1.5，那就是說要求兩種組分完全分離。
9、檢出限和定量限有什么區別？
問題描述：什么是檢出限？什么是定量限？兩者有什么區別？
①兩者的定義如下：
a、檢出限(LOD，Limit of Detection)：分析方法在規定實驗條件下所能檢出被測組分的最低濃度或最低量；
b、定量限(LOQ，Limit of Quantification)：分析方法可定量測定樣品中待測組分的最低濃度或最低量。
②兩者的區別如下：
a、檢出限指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。它是限度檢驗效能指標，無需定量測定，只要指出高于或低于該規定濃度即可。
b、定量限指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結果應具有一定準確度和精密度要求。
c、檢出限或定量限的測定通常是在目標物的含量接近于“零”的時候才需要進行測定。當方法應用于所測定的分析物濃度要比定量限大的多時，檢出限與定量限評定就顯的不是非常有必要了。但是對于那些濃度接近于檢出限與定量限的痕量和超痕量測試，常報出“未檢出”時，這時檢出限或定量限對于風險評估或法規決策則就顯得非常的重要。
d、不同的基體需要獨立評估其檢出限和定量限。
e、通常3倍信噪比是檢出限，10倍信噪比是定量限，但是不同的領域有不同的規定，測定檢出限和定量限的方法也不一樣。
10、如何獲得檢出限？
問題描述：如何獲得檢出限？有沒有參考標準？
①可用多種方式獲得檢出限，昌暉儀表羅列了一些常見的獲得檢出限的方法。
a、基于虛擬(Visual)評估LOD：
Visual評估可應用于非儀器方法和儀器分析方法，同時也可應用于定性測試方法的評估。通過往樣品空白中添加已經濃度待測物質進行分析，評定能夠可靠被檢測出的最低濃度值。
在樣品空白中加入一系列不同濃度的分析物，在每一個濃度點需要進行約7次的獨立測試。各個濃度點的重復性測試應該隨機。對于定性分析，通過繪制陽性百分比(陰性)與濃度之間的響應曲線，檢查確定哪個濃度閾值是不可靠的。
b、空白標準偏差進行評定LOD
通過分析大量的空白進行評定(推薦20個以上)。樣品空白獨立測試的次數(n大于10以上)，以及加入最低可接受濃度的樣品空白測試次數(n大于10次以上)。LOD的評定可用樣品空白平均值加上3倍標準偏差。
c、基于校準曲線的LOD評定
如果LOD數據或與LOD相近的數據無法得到，則可利用校準曲線的參數進行評估。用空白加上空白的3倍偏差，儀器對于空白的響應可用方程截距a表示，儀器響應的標準偏差可用校準曲線的標準偏差Sy/x來表示。故可利用方程yLOD=a+3Sy/x=a+bxLOD，則xLOD=3Sy/x/b。這個方程廣泛應用于分析化學。然而由于這是推斷，當濃度接近于期望LOD時，則所測定的數據就會顯得不那么可靠，建議當濃度接近于LOD時，需要證明要在合適的置信區間內能夠被測定出來(可靠地被測定出來)。
d、基于信噪比LOD
由于儀器分析過程都會有背景噪聲，常用的方法就是利用已經低濃度的分析物與空白樣品的測量信號進行比較，確定出能夠可靠測定出的最小濃度，最典型的可接受的信噪比是2：1或3：1。
②不同領域，獲得檢出限的依據不一樣，下面羅列了部分參考依據。
a、GB/T 27417-2017《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》；
b、JJG 705-2014《液相色譜儀》；
c、HJ 168-2010《環境監測 分析方法標準制修訂技術導則》；
d、GBZ/T 210.4-2008《職業衛生標準制定指南 第4部分：工作場所空氣中化學物質的測定方法》。
